FITC荧光标记试剂盒

试剂盒使用方法：

  1.按照表1，准备好待标记抗体/蛋白^*；

*buffer pH要求：

pH 6.5-8.5。

buffer 组分要求：

理想的buffer：PBS；HEPES；钾盐；钠盐。

有限制的成分：Tris需要≤ 50 mM / 0.6%；BSA≤0.1%；甘油≤10%。

不能含有的成分：精氨酸；谷胱甘肽；DTT。

如果buffer不能满足要求，需要先将样品在PBS中透析。

小量样品可采用微量透析杯，货号：*******。

2. 用5μL染料溶解液溶解冻干粉末；

3. 将溶解好的染料加入到待标记抗体/蛋白中^*，混匀，放入避光袋中，于摇床上摇晃或旋转反应3h^**，或4℃反应过夜；

*加入过程中可能出现少量絮状物，枪头吹打几次，摇晃混匀后絮状物会消失。

**旋转反应30min即可达到90%反应率，3h反应率＞99%。

4. 预处理脱盐柱：

加入300 μL标记缓冲液至脱盐柱内管中，静待2min使其完全膨胀，1000g离心2min，弃掉外管液体。

Wash：加入300 μL标记缓冲液至脱盐柱内管中，1000g离心2min，弃掉外管液体。

重复Wash，1次。弃外管，将脱盐柱内管放入1.5ml收集管中，待用。

5. 标记反应产物，离心机瞬离后，全部转移到脱盐柱内管中^*，静置1min后1000g离心2min，收集标记产物，弃脱盐柱内管；

*反应产物尽可能加在脱盐柱填料中间，避免沿管内壁加入。

6. （可选）如需较长保存时间，标记产物中加入1/4~1/9体积的5×保存液^*。

*保存液的工作浓度为0.5×-1×；保存液中含有甘油，防腐剂，BSA。

7. （可选）试剂盒附赠1支闭光管，可将标记产物转移至避光管中，或放入避光袋中4℃避光保存。

8. （可选）FITC标记效率检测。

表1：与异硫氰酸荧光素（FITC）偶联所需抗体/蛋白的量和体积

*使用最大抗体用量可能会导致每个抗体的标记量减少。

**理想的抗体浓度为 ＞1mg/ml。低于1mg/ml标记效率会降低。

***如标记物为蛋白，按照“推荐抗体/蛋白用量”使用。超过推荐用量会使标记量显著降低。